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FAP患者淀粉样变诊断方法的研究--《天津医科大学》2012年硕士论文
来自 : cdmd.cnki.com.cn/article/cdmd-
发布时间:2021-03-25
宋林 【摘要】:目的:1.转甲状腺素Transthyretin (TTR)蛋白主要由肝脏细胞、神经脉络丛细胞合成分泌进入血液与组织中,具有转运甲状腺素和维生素A的功能。但研究发现该蛋白为家族性淀粉样变多发性神经性损害(familial amyloidotic polyneuropathy, FAP )和老年系统性淀粉样变(senile systemic amyloidosis, SAA)的前体蛋白。由于FAP和SSA淀粉样变的发病机制及治疗方法存在差异,从分子水平鉴别诊断两种淀粉样变,对于治疗具有指导意义。目前缺乏理想的分子诊断TTR相关淀粉样变方法与技术。本研究探索淀粉样变诊断方法和诊断程序,指导TTR相关淀粉样变临床诊断和治疗。2.分析FAP患者心脏、消化道TTR淀粉样变沉积程度及其分布特点,探讨家族性淀粉样变多发性神经性损害中的淀粉样变形成机制。方法:1.选取患有FAP病人组织,进行病理切片。刚果红染色(Congo red,CR)染色和偏振光显微镜观察,确定诊断淀粉样变沉积于组织;对CR阳性和偏振光下有双折光现象的组织进行免疫组织化学染色以鉴定蛋白沉积类型。对TTR相关基因进行扩增,测序分析TTR基因突变类型。利用质量分析装置法(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF/MS)测定TTR基因突变,建立质谱直接测定血清TTR突变的方法。设计能够与淀粉样变特异性结合的荧光探针,建立快速、特异诊断淀粉样变方法。2.组织形态学分析确定TTR淀粉样变沉积程度及其分布特点。结果:1. FAP患者组织CR染色与偏振光显微镜检查,确定肾脏、心脏、小肠、小脑组织内淀粉样变沉积阳性。提取FAP患者血细胞DNA,经过PCR扩增和PCR结果DNA测序,确定患者基因型为ATTR Val30Met;进一步利用MALDI-TOF/MS法分析相同患者血清TTR蛋白质谱特点,制定MALDI-TOF/MS法测定TTR标准。免疫组化染色法结果显示淀粉样变沉积前蛋白为TTR。荧光标记探针与淀粉样变纤维具有亲和性,而与血清TTR蛋白之间未有明显亲和性。进一步观察标记探针与组织内沉积淀粉样变的亲和性,结果在CR染色阳性组织内,荧光探针染色阳性,而在CR染色阴性组织内,荧光染色阴性。2. FAP患者心脏组织刚果红染色与偏振光显微镜检查确定淀粉样变沉积阳性,且心肌纤维间隙存有明显淀粉样变沉积。结论:1.首次报道了 MALDI-TOF/MS法直接测定血清TTR蛋白突变的方法,能够用于临床检测TTR突变与化学修饰。设计并合成了能够与淀粉样变结合探针,建立了荧光快速诊断淀粉样变的方法,本方法适用于临床快速诊断淀粉样变,尤其在临床手术中需要诊断淀粉样变诊断方面具有特异与快速的特点。2.发现FAP ATTR Val30Met患者心肌间隙与疏松间质处淀粉样变沉积明显,提示机体内TTR的载体运输或蛋白化学修饰等因素在淀粉样变形成机制中可能具有重要作用。
但研究发现该蛋白为家族性淀粉样变多发性神经性损害(familial amyloidotic polyneuropathy, FAP )和老年系统性淀粉样变(senile systemic amyloidosis, SAA)的前体蛋白...心肌 淀粉样变 诊断 免疫组织化学 家族性淀粉样变多发性神经损害 刚果红 转甲状腺素蛋白心肌 淀粉样变 诊断 免疫组织化学 家族性淀粉样变多发性神经损害 刚果红 转甲状腺素蛋白FAP患者淀粉样变诊断方法的研究
但研究发现该蛋白为家族性淀粉样变多发性神经性损害(familial amyloidotic polyneuropathy, FAP )和老年系统性淀粉样变(senile systemic amyloidosis, SAA)的前体蛋白...心肌 淀粉样变 诊断 免疫组织化学 家族性淀粉样变多发性神经损害 刚果红 转甲状腺素蛋白心肌 淀粉样变 诊断 免疫组织化学 家族性淀粉样变多发性神经损害 刚果红 转甲状腺素蛋白FAP患者淀粉样变诊断方法的研究
本文链接: http://fapsupplies2012.immuno-online.com/view-735978.html
发布于 : 2021-03-25
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